Vakcína na částice podobné viru a její proces čištění následného proudu
Vakcína podobná viru (VLP) je technologie vakcíny, která je založena na virové struktuře, ale neobsahuje virové genetické materiály. Stimulují silnou imunitní odpověď napodobováním morfologie a povrchových antigenů přírodních virů a poskytují větší bezpečnost kvůli jejich neschopnosti replikovat. Vakcíny VLP jsou lepší alternativou k tradičním vakcínám (živé oslabené a inaktivované). Vakcína VLP se nemůže v těle replikovat, takže je vhodná pro všechny, včetně těhotných žen nebo žen s ohroženými imunitními systémy. Kromě toho mohou být také k vývoji VLP vakcín, jako jsou chřipkové viry, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou viry chřipky, jako jsou "viry africké" viry africké viry africké viry africké viry africké viry africké "viry africké viry africké viry africké viry africké viry africké viry. Za druhé, VLP jsou schopny napodobit strukturu skutečných virů, na rozdíl od inaktivovaných vakcín, jejichž strukturální proteiny mohou být během inaktivace modifikovány, což vede k imunogennímu poškození.
Obr. 1. Mechanismus formování VLP a Chiméra VLPS
Rysy vakcíny VLP
1. Struktura podobná přírodním virům: VLP jsou samostatně sestaveny virovými nebo více strukturálními proteiny (jako jsou proteiny kapsidy) a jejich velikost a tvar jsou podobné reálným virům.
2.. Neinfekční: neobsahuje virový genom, nemůže replikovat nebo způsobit onemocnění.
3. Vysoká imunogenita: imunitní systém může být efektivně rozpoznán a aktivovat reakce B buněk a T buněk. Může vyvolat neutralizační protilátky a buněčnou imunitu (např. HIV, HPV vakcíny).
4. Vysoká bezpečnost: Vhodné pro lidi s nízkou imunitní funkcí (jako je vakcína proti VLP hepatitidy B).
Obr. 2. dostupné vakcíny proti VLP
Produkční systém vakcíny VLP
VLP lze vyrábět prostřednictvím různých expresních systémů, běžné platformy zahrnují:
1. Systém hmyzích bakulovirů:
Výhody: Vysoký výnos, nízké náklady, vhodné pro komplexní sestavení proteinů.
Aplikace: Vakcína proti HPV, vakcína Ebola.
2. buňky savců (např. Buňky HEK293):
Výhody: posttranslační modifikace jsou blíže k lidem a jsou vhodné pro obávané VLP (jako jsou vakcíny proti chřipce).
3. kvasinkové systémy (např. Pichia pastoris):
Výhody: Rychlé, nízké náklady byly použity ve vakcíně proti hepatitidě B.
4. rostlinné systémy (např. Chloroplasty tabáku):
Ekologické a škálovatelné, ve vývoji (např. Norovirus VLP vakcína).
Proces čištění po proudu VLP vakcíny
Rozmanitost expresních systémů VLPS vede k inuniverzitě procesů purifikace downstream.
Obr. 3 Obecný vývojový diagram procesu downstream
Sklizeň a objasnění:
Ve všech druzích kultivačního média, prosazující buněčnou kulturu, existuje velké množství virových částic, stejně jako mnoho zbytků buněčné tkáně, metabolické produkty a další nečistoty, takže kultivační médium je zakaleno nebo polokroudované, pokud bude soustředit kultivační médium přímo, ultrafiltrační membrána bude blokována, bude blokována koncentraci a ultrafiltrační membrána. Proto musí být nejprve objasněn před koncentrací, aby se odstranily velké částice v kultivačním médiu, aby se stala průsvitným nebo průhledným roztokem a koncentrace kultivačního média může zajistit normální proces koncentrace a zajistit životnost ultrafiltrační membrány. Objasnění před koncentrací kulturního řešení je klíčovým technickým spojením v procesu koncentrace.
Efektivní proces objasnění vyžaduje kombinaci vysoké kapacity k odstranění pevných částic, vysokého výnosu produktu, snadné rozšiřování a ochranu pro provozní jednotky downstream.
Metoda
Centrifugace: Diferenciální centrifugace odstraňuje velké částice.
Hluboká filtrace: K objasnění supernatantu použijte vícestupňový filtr (např. 1,2 μm → 0. 45μm).
Filtrace tangenciálního toku (TFF): Vhodné pro hmotnostní produkci, koncentrace vzorků a odstraňuje malé částice nečistot.
Pokud je však kultivační stupnice příliš velká, odstředění trvá dlouho, bude vyžadováno velké množství hlubokých filtračních membrán, takže náklady na spotřební materiál se značně zvyšují. Současně vysoká hustota buněčné kultury sníží zatížení hluboké filtrační membrány, což povede ke zvýšeným nákladům a nadměrnému ředění produktu.
Existují dva druhy komponent membrány TFF: plochá kazeta a dutá vlákna. Filtrace tangenciálního toku (TFF) je poháněna transmembránovým tlakovým rozdílem. Látky a nečistoty, které jsou menší než membránové póry, procházejí membránou, zatímco nečistoty, jako jsou buňky s většími částicemi, jsou zachyceny. Velikost pórů membrány použité pro mikrofiltraci je {{0}}. 45/0,22 μm. Dutá vlákna může přímo zpracovat vysoký pevný obsah kapaliny, jako je buněčné kultivační médium s vysokou hustotou, může eliminovat centrifugační a předfiltrační kroky, méně kroků, jednoduchý provoz, membrána lze opakovaně použít prostřednictvím čištění, snížením investic do zařízení a provozními náklady v souladu s požadavky modulární automatizované výroby.
Ultrafiltrační koncentrace (TFF):
Cíl: Chcete -li snížit množství chromatografického ošetření, zlepšit chromatografickou účinnost a chránit chromatografickou kolonu.
Obecně se ultrafiltrace (TFF) může soustředit více než 100krát VLP a rychlost odstranění heteroproteinu může dosáhnout 99%. Mezi nimi má technologie filtrace dutých vláken filtrace výhod mírné a nízké smykové síly, není snadné se připojit, flexibilní provoz, dlouhou životnost, nízké náklady a snadné zesílení, takže se doporučuje vybrat duté vlákno pro koncentrované a čištěné VLP.
Pokud se pro koncentraci a čištění používá metoda ultrafiltrace, je velmi důležité vybrat správnou velikost pórů membrány, která určuje účinnost a kvalitu koncentrace přímo. Na jedné straně je nutné vybrat membránovou clonu, aby se účinně zachytil cílové molekuly, aby se zajistil výtěžek, a na druhé straně by měl být plně zvážen účinek odstranění a rychlost zpracování heteroproteinů. Nejlepším principem je proto vybrat membránu s největší velikostí pórů, která může zachytit cílovou molekulu, a pokusit se vybrat filtrační membránu s jednotnou distribucí velikosti pórů.
Primární čištění:
1. Metoda srážení
Srážení polyethylenglykolu (PEG): Selektivní srážení VLP vyžaduje optimalizovanou koncentraci PEG a koncentraci soli, aby se vyrovnal výtěžek a čistotu.
2. chromatografie
Afinitní chromatografie:
Afinita heparinu: Použití vlastností VLPS povrchového negativního náboje (např. HPV VLP).
Chromatografie protilátky protilátky: vysoká specificita, ale drahá.
Chromatografie iontové výměny (IEX): Vyberte aniontovou výměnu (např. Kolona Q) nebo výměna kationtu (např. SP sloupec) v závislosti na vlastnostech povrchového náboje VLP a optimalizujte gradient pH a soli, aby se zabránilo agregaci částic.
Hydrofobní interakční chromatografie (HIC): Na základě povrchové hydrofobicity povrchu VLPS, vhodná pro některé nekapsané VLP.
Jemné čištění:
Chromatografie molekulárního vylučování (SEC, gelová filtrace):
Odstranění zbytkových hostitelských proteinů, nukleových kyselin nebo agregátů, doprovázených náhradou pufru. Vysoké rozlišení, ale nízký tok, často používaný jako konečný krok zdokonalení.
Chromatografie s více režimy:
Například pryskyřice řady Capto Core, kombinované s výměnou iontu a molekulárním sítem, mohou v jednom kroku odstranit různé nečistoty.
Inaktivace viru/odstranění kyseliny nukleové (v případě potřeby):
Nukleázová ošetření: například benzonáza degraduje hostitelskou DNA/RNA.
UF/DF: Koordinační systém TFF pro odstranění malých fragmentů nukleových kyselin a enzymů.
Koncentrace a příprava:
Filtrace tangenciálního toku (TFF):
Soustřeďte se na cílové titry při vysídlení vyrovnávacích pamětí (jako jsou PBS nebo formulační vyrovnávací paměti).
Sterilní filtrace:
0. Filtrace membrány 22 μm zajišťuje sterilitu.
Typický případ
Níže jsou uvedeny procesy purifikace downstream pro typické VLP vakcíny.
O směrnicích
Vůdák je technologie zaměřená na výrobu a high-tech podnik zaměřený na objasnění, oddělení a čištění biofarmaceutických látek. Produkty se široce používají při filtračním procesu mAb, vakcíny, diagnostiky, krevních produktů, séra, endotoxinu a dalších biologických produktů; Technologie směrnic má filtr „kazety filtr a filtrační zařízení tangenciálního toku“, „membrána s dutým vláknem“, „filtr viru“, „hluboká membrána“, „sterilizační filtr“, „odstředivé filtrační zařízení“ a další produkty a má další produkční produkci a výroba a výroba a výroba a výroba a výroba. Technologie směřování se těší na spolupráci s vámi!
