Následný proces čištění vakcíny proti prasečímu průjmu

Průjem je jednou ze tří hlavních nemocí, které způsobily velké ekonomické ztráty prasečímu průmyslu v Číně. Existuje mnoho faktorů způsobujících průjem u prasat a virové faktory jsou nejzávažnější. Mohou být infikována prasata všech věkových kategorií, zejména selata, a úmrtnost po infekci může dosáhnout více než 50 %. Virus prasečí epidemické diarey (PEDV) a virus přenosné gastroenteritidy prasat (TGEV) jsou ve světě rozšířené a tyto dva viry mohou být infikovány jednotlivě nebo v kombinaci. V současné době neexistují žádné specifické léky k léčbě PEDV a TGEV a prevencí a kontrolou prasečího průjmu jsou především komerční vakcíny.

Tradiční vakcíny proti epidemickému průjmu prasat zahrnují hlavně celovirovou inaktivovanou vakcínu a živou atenuovanou vakcínu. Klinicky se běžně používá PEDV a TGEV tandemová inaktivovaná vakcína nebo atenuovaná vakcína a PEDV, TGEV a prasečí rotavirus (RV) trojitá inaktivovaná vakcína nebo atenuovaná vakcína, většinou PEDV a TGEV tandemová vakcína.

V současné době existuje v Číně mnoho vakcín proti epidemickému průjmu prasat.

Výrobní proces inaktivovaných a atenuovaných vakcín je podobný, zahrnuje především pět kroků kultivace patogenu, inaktivaci nebo atenuaci patogenu, extrakci a čištění patogenu, přípravu a balení vakcíny a kontrolu kvality vakcíny. Tento článek představuje především postup čištění patogenů.

Vyjasnění

Účelem čiření je zajistit odstranění buněčných zbytků a jiných shluků velkých částic. Při produkci různých jedů v buněčných kulturách, kromě toho, že obsahuje velké množství virových částic, existuje mnoho zbytků buněčné tkáně a metabolických produktů a dalších nečistot, takže jed ve stavu zataženo nebo polojasno je přímým použití této operace koncentrace jedu brzy zablokuje ultrafiltrační membránu a nemůže dokončit koncentraci jedu, což má za následek odpad ultrafiltrační membrány. Než se tedy jed zahustí, musí se nejprve vyčeřit, což se obvykle provádí nízkootáčkovou centrifugací a membránovou filtrací. Je třeba poznamenat, že při použití technologie membránové separace, vzhledem k tomu, že materiál membrány je často s elektronegativitou nebo hydrofobními skupinami, je nutné zkoumat, zda má materiál membrány adsorpci na virové částice.

Účinný krok čištění vyžaduje kombinaci vysoké kapacity odstraňování pevných částic a vysokého výtěžku produktu, snadného zesílení a ochrany pozdějších provozních jednotek. V současné době se pro čiření používá hluboký filtr.

Pokud je však kultivační měřítko příliš velké, bude zapotřebí velký počet hlubokých filtračních membrán, což povede k podstatnému zvýšení nákladů na spotřební materiál. Vysoká hustota buněčné kultury zároveň sníží zatížení membrány hlubokého filtru, což má za následek zvýšené náklady a nadměrné ředění produktu.

Metoda mikrofiltrace používá hlavně filtrační zařízení s tangenciálním průtokem a membránové komponenty jsou ploché membránové kazety a duté vlákno. Tangenciální průtoková filtrace (TFF) je řízena transmembránovým tlakovým rozdílem. Látky a nečistoty menší než velikost pórů membrány procházejí membránou, zatímco nečistoty, jako jsou buňky s většími částicemi, jsou zachyceny. Velikost pórů membrány použité pro mikrofiltraci je {{0}},45/0,22μm. Mikrofiltrace s tangenciálním tokem dutých vláken může přímo zpracovávat kapalinu s vysokým obsahem pevných látek, jako je médium pro kultivaci buněk s vysokou hustotou, může eliminovat kroky odstřeďování a předfiltrace s menším počtem kroků a jednoduchou obsluhou, membránu lze opakovaně používat čištěním, což snižuje investice do zařízení a provoz náklady, v souladu s požadavky modulární automatizované výroby.

Koncentrace a čištění

Po předběžném vyjasnění obsahuje kultivační médium viru stále velké množství nečistot, včetně defektních částic, virového obalu, cytotoxinu, média, séra a buněčných fragmentů atd. Pokud jsou tyto nečistoty injikovány zvířatům, ovlivní nejen účinnost vakcínou, ale také způsobit silnou imunitní odpověď hostitele a dokonce vést ke smrti očkovaných zvířat. Proto je zapotřebí koncentrace a čištění k odstranění nečistot, jako jsou heteroproteiny a buněčné fragmenty, zesílení a vyvolání účinných imunitních reakcí, snížení množství použité vakcíny a snížení nežádoucích reakcí.

Princip purifikace viru: zachovat biologickou aktivitu a infekčnost viru jako předpoklad, odstranit virové nečistoty a extrahovat vysokou čistotu viru.

V současnosti jsou hlavními metodami koncentrace a čištění používanými ve velkovýrobě ultrafiltrace.

Ultrafiltrační metoda, používá hlavně ultrafiltrační zařízení s tangenciálním tokem, filtrační systém s dutými vlákny a další filtrační zařízení, za normálních okolností může použití metody ultrafiltrace způsobit, že se virus koncentruje více než 100krát, rychlost odstranění heteroproteinu až 99%. Mezi nimi má technologie membránové filtrace z dutých vláken výhody mírné a nízké smykové síly, snadného ucpávání, flexibilního provozu, dlouhé životnosti a nízké ceny a snadného zesílení, proto se doporučuje zvolit duté vlákno pro koncentraci a čištění virů.

Při použití ultrafiltrační metody pro koncentraci a čištění je velmi důležité vybrat vhodnou velikost pórů membrány, která přímo určuje účinnost a kvalitu koncentrace. Na jedné straně je nutné vybrat membránovou aperturu tak, aby účinně zachytila ​​cílové molekuly pro zajištění výtěžku, a na druhé straně je třeba plně zvážit efekt odstraňování a rychlost zpracování heteroproteinů. Proto je nejlepším principem vybrat membránu s největší velikostí pórů, která dokáže zachytit cílovou molekulu, a pokusit se vybrat filtrační membránu s rovnoměrnou distribucí velikosti pórů.

Virus prasečí epidemie průjmu (PEDV) a přenosný virus gastroenteritidy (TGEV) jsou oba koronaviry, což jsou polymorfní koule s převrácenými hroty podobnými hrotům o průměru od 60 do 190 nm. Rotavirové onemocnění je zoonotické onemocnění, při kterém má rotavirus (RV) vzhled podobný kolu a má průměr asi 70 nm. Tyto tři viry lze obecně zachytit pomocí 100-750kd aperturních ultrafiltračních membrán.

Guidling Technology je národní high-tech podnik se zaměřením na biofarmaceutika, buněčné kultury, čištění a koncentraci biomedicíny, diagnostiky a průmyslových tekutin. Úspěšně jsme vyvinuli odstředivá filtrační zařízení, ultrafiltrační a mikrofiltrační kazety, virový filtr, TFF systém, hloubkový filtr, dutá vlákna atd., která plně splňují aplikační scénáře biofarmaceutik, buněčných kultur a tak dále. Naše membrány a membránové filtry jsou široce používány při zahušťování, extrakci a separaci předfiltrace, mikrofiltrace, ultrafiltrace a nanofiltrace. Naše mnoho produktových řad, od malých laboratorních filtrací na jedno použití po produkční filtrační systémy, testování sterility, fermentace, buněčné kultury a další, splňuje potřeby testování a výroby. Guidling Technology se těší na spolupráci s vámi!