Efektivní a levný proces čištění a ultrafiltrace kvasinek exprimujících rekombinantní proteiny
Exprese exogenních genů v kvasinkách může nejen produkovat rekombinantní proteiny a peptidy, protilátky a vakcíny, cytokiny, růstové faktory, hormony a další bioaktivní látky, ale může být také využita k výrobě průmyslových enzymů, funkčních potravin a biologických materiálů, což má široké uplatnění. .
Kvasinkový expresní systém zahrnuje dva běžně používané expresní systémy, tj. expresní systém saccharomyces cerevisiae a metanotrofní kvasinkový expresní systém. Metanolový kvasinkový expresní systém je v současnosti nejrozšířenějším kvasinkovým expresním systémem a nejběžněji používaným je Pichia, který může využívat methanol jako uhlík a energii. Kromě toho existují Hansenovy kvasinky, Sphaeroides a tak dále.
Bez ohledu na to, jaký druh kvasinkového expresního systému, jeho následné separační a purifikační procesy jsou podobné a specifický tok procesu bere kvasinkovou expresi rekombinantních proteinů a polypeptidových léčiv jako příklad.
Vodící mikrofiltrační membránové kazety využívají režim filtrace s otevřeným průtokovým kanálem a tangenciálním průtokem, který dokáže efektivně zpracovat komplexní krmnou kapalinu, jako je kvasná fermentační kapalina a krakovací kapalina E. coli, při vysoké rychlosti a může zajistit lineární amplifikaci od malého testu až po výrobní měřítko. Kompaktní modulární konstrukce, jednoduché připojení potrubí, nezávislost a čitelnost systému mohou chránit operátory a zabránit biologickému znečištění. A žádná kontrola údržby a čištění. Proto je velmi vhodný pro krok čeření raného následného zpracování.
Hlavním účelem procesu UF/DF je odstranit nečistoty a vytěsnit pufry. Vodící ultrafiltrační membránová kazeta má dobrou homogenitu velikosti pórů membrány a silnou hydrofilitu, což může poskytnout membráně vyšší tok a nižší adsorpci proteinů a optimalizovaný design průtokového kanálu s menším poklesem tlaku, snadným přenosem materiálu a výrazně zkrátit dobu filtrace. Kromě toho je produktová řada kompletní a flexibilní, aby vyhovovala potřebám různých aplikací různých měřítek. Proto je velmi vhodný pro krok UF/DF následného zpracování.
Následuje případ aplikace vodicí membránykazetav kvasinkové expresi rekombinantních proteinů.
Mikrofiltrační čiření
Použili jsme {{0}} 0,11 čtverečních metrů 0,22μm pórovou membránovou kazetu k vyčeření 1,5 l kvasnicové fermentační kapaliny (molekulová hmotnost cílového proteinu 42-55 KD) mikrofiltrací. V celém procesu mikrofiltrace byla zkoumána rychlost výtěžnosti cílového proteinu, změna zákalu a deplece membránového toku.
0-17min je proces koncentrace, 17-32min je proces mytí a filtrace. Během celého procesu mikrofiltrace se TMP postupně zvyšoval, rychlost vstupu kapaliny zůstala nezměněna a průměrný tok materiálu byl 45 LMH.
Zákal kapaliny byl 600 NTU před mikrofiltrací a 8 NTU po mikrofiltraci a zákal se zjevně měnil.
Výsledky ukázaly, že výtěžek cílového proteinu byl > 90 %. Technologie Guidling Technology 0,22μm membránová kazeta je stabilní a vhodná pro tento scénář použití.
Ultrafiltrační koncentrace
Ultrafiltrační koncentrace 1,5 l vyčištěné kapaliny (molekulová hmotnost cílového proteinu 42-55kd) byla provedena pomocí 0,11 čtverečních metrů 10kd membránové kazety. V celém procesu ultrafiltrace byla zkoumána rychlost obnovy cílového proteinu, vyčerpání membránového toku a rychlost obnovy toku vody.
Před a po použití může míra regenerace membrány dosáhnout 90 %.
0-15min je proces koncentrace, 15-18min je proces výměny kapaliny. Během celého procesu ultrafiltrace se TMP postupně zvyšoval, rychlost vstupu kapaliny zůstala nezměněna a průměrný tok materiálu byl 50 LMH.
Výsledky ukázaly, že cílový protein byl zcela zachycen. Technologie Guidling Technology 10kD membránové kazety mohou pracovat stabilně a jsou vhodné pro tento scénář použití.
Většina rekombinantních proteinů exprimovaných kvasinkami nebyla vysoce exprimována. Zákal přefiltrované kapaliny byl zjevně snížen a rychlost regenerace proteinu byla vyšší. Protože následná chromatografická doba je příliš dlouhá, způsobí nepříznivé účinky na protein, aby se zkrátila doba chromatografického vzorkování, lze přidat jeden krok ultrafiltrační koncentrace a cílový protein lze rychle koncentrovat po vzorku, což může dosáhnout účelu úspory času, snížení objemu plniva a tím snížení výrobních nákladů.
Mikrofiltrační membránové kazety Guidling Technology mohou obecně snížit zákal přiváděné kapaliny na méně než 20 NTU, což plně vyhovuje potřebám následné ultrafiltrace a chromatografie. Míra obnovy ultrafiltrace u ultrafiltračních membránových kazet se bude lišit v důsledku různých materiálů, obecná míra obnovy může dosáhnout 90-95 %.
Guidling Technology vás vítá, když si vyžádáte testovací sady pro související hodnocení.
O Guidlingu
Guidling Technology je národní high-tech podnik se zaměřením na biofarmaceutika, buněčné kultury, čištění a koncentraci biomedicíny, diagnostiky a průmyslových tekutin. Úspěšně jsme vyvinuli odstředivá filtrační zařízení, ultrafiltrační a mikrofiltrační kazety, virový filtr, TFF systém, hloubkový filtr, dutá vlákna atd., která plně splňují aplikační scénáře biofarmaceutik, buněčných kultur a tak dále. Naše membrány a membránové filtry jsou široce používány při zahušťování, extrakci a separaci předfiltrace, mikrofiltrace, ultrafiltrace a nanofiltrace. Naše mnoho produktových řad, od malých laboratorních filtrací na jedno použití po produkční filtrační systémy, testování sterility, fermentace, buněčné kultury a další, splňuje potřeby testování a výroby. Guidling Technology se těší na spolupráci s vámi!
